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菌落pcr鉴定有目的条带,但不亮,而且引物二聚体很亮

作者 微梁
来源: 小木虫 200 4 举报帖子
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载体用的pet32a用NdeI和XhoI双切,引进一个带BamHI的酶切位点的片段
PCR:模板 2ul
F  1ul
R  1ul
dNTPmix   1.6ul
10xBuffer  2ul
酶   1ul
水   12ul 不知道哪里出问题了

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  • 精华评论
  • 紫风舞鸢

    模板的量太少,或者循环数太低,适当提高退火温度,引物各取0.5ul试一试。

  • 伤何处

    菌液PCR 有目的条带,虽然不亮 但是也能证明是阳性。
    然后引物二聚体很亮,我觉得可能是你的退火温度太高了,引物结合模板的很少。
    建议降低退火温度。(其实我这么久都没用过64的退火温度....一般都用的55 56),

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