菌落pcr鉴定有目的条带,但不亮,而且引物二聚体很亮
载体用的pet32a用NdeI和XhoI双切,引进一个带BamHI的酶切位点的片段
PCR:模板 2ul
F 1ul
R 1ul
dNTPmix 1.6ul
10xBuffer 2ul
酶 1ul
水 12ul 不知道哪里出问题了
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载体用的pet32a用NdeI和XhoI双切,引进一个带BamHI的酶切位点的片段
PCR:模板 2ul
F 1ul
R 1ul
dNTPmix 1.6ul
10xBuffer 2ul
酶 1ul
水 12ul 不知道哪里出问题了
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模板的量太少,或者循环数太低,适当提高退火温度,引物各取0.5ul试一试。
菌液PCR 有目的条带,虽然不亮 但是也能证明是阳性。
然后引物二聚体很亮,我觉得可能是你的退火温度太高了,引物结合模板的很少。
建议降低退火温度。(其实我这么久都没用过64的退火温度....一般都用的55 56),