请问现在蛋白是包涵体形式,纯化后,需要复性才能制备抗体吗?如果复性不成功可以制备抗体不? 返回小木虫查看更多
不能
做抗原得到蛋白的话不需要复性。包涵体蛋白就可以了。因为抗体是针对蛋白表位的(各个肽段),而不是功能。 除了一种情况就是蛋白空间构象导致某些表位的产生,但是这个情况特殊的很,通常情况不需要考虑的。 而且原核蛋白复性一定具有活性?没这回事。复性是一个不可控的过程。 我是做抗体。如果有疑问可以留言
必须要复性,包涵体蛋白是以无规则形态存在的,楼上说不需要复性,蛋白抗原表位都没有充分展示怎么去免疫?!必须要复性,有活性的蛋白才能诱导机体免疫,产生抗体
不需要,变形抗原更好
不能
做抗原得到蛋白的话不需要复性。包涵体蛋白就可以了。因为抗体是针对蛋白表位的(各个肽段),而不是功能。
除了一种情况就是蛋白空间构象导致某些表位的产生,但是这个情况特殊的很,通常情况不需要考虑的。
而且原核蛋白复性一定具有活性?没这回事。复性是一个不可控的过程。
我是做抗体。如果有疑问可以留言
His标签蛋白纯化,用的是碧云天的盒子。用100 mM咪唑的洗涤液洗涤两次后,用500 mM或800 mM咪唑的洗脱液洗脱,但总是有纯化后SDS-PAGE检测总有杂蛋白。应该怎么改良洗涤液和洗脱液的浓度和次数呢?
另外,诱导时菌液的OD值、IPTG浓度、培养温度和时间,对原核表达蛋白量影响最大的是哪一个?原核蛋白表达量不高,应该怎么优化?感受态的种类如Tran θ和BL21对蛋白表达量有影响吗?
不甚感激
,
必须要复性,包涵体蛋白是以无规则形态存在的,楼上说不需要复性,蛋白抗原表位都没有充分展示怎么去免疫?!必须要复性,有活性的蛋白才能诱导机体免疫,产生抗体
我最近也在做抗体,QQ号 1070420075~ 欢迎交流
不需要,变形抗原更好