线性化载体胶回收浓度怎么办?
我用的诺维赞一步克隆试剂盒,先将表达载体酶切为线性化载体,再利用同源重组原理将目的基因连接到载体上,现在问题是线性化载体胶回收浓度才8.9纳克每微升,插入片段是30纳克每微升,说明书要求线性化载体使用量为0.03pmol,插入片段使用量为0.06pmol,根据我片段计算线性表达载体需要加220纳克,插入片段需要加30纳克,由于表达载体胶回收浓度太低,重组后做转化板子上没有长菌落,请问怎么提高胶回收浓度啊?现在胶回收用的康为试剂盒。下图为酶切之后跑胶图。
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你的条带挺亮的,切胶的时候尽量切的准确,不要切到过多的空胶。我们实验室用的天根的盒子,回收率还挺高的。
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第一步放到套件离心后,把离心的液体再次放入滤膜,再次离心
最后溶解时,可以把水预热到60度,然后加入溶解
一步克隆效率很高的,回收效率低你多扩几管pcr不就可以解决了,祝好
还有你的条带是单一的,你可以直接过柱子回收,不用跑胶回收,减少跑胶时的损失
用生工的胶回收试剂盒,按步骤进行即可
我们实验室用的是omega的glass milk的胶回收试剂盒,不用过柱子,感觉回收效率还是挺高的