PCR污染,存在假阳性带,,盼大神急救
我在PCR过程中遇到很奇葩的现象,阴性对照组(模板为水),会P出来阳性条带,而且与目的带(目的带在186bp左右)大小在同一位置。
1,尝试了更换不同的退火温度(58/62/65),假阳性带依然存在。。。。,
2,曾经以为假阳性带会是交叉引物二聚体类产物,尝试了PCR体系中添加5%DMSO以及将引物100℃煮沸再用,结果还是存在假阳性。。
3,试着换掉了TAQ酶及DNTP还有水,依然是徒劳。。。
下图的左一模板为水,后面依次为不同浓度的阳性模板。。PCR的退火温度为58℃,循环数目35.
我想请教下各位大神,还有什么好的办法来找到PCR污染或者假阳性带的原因,或者是不是因为目的带偏小,所以才会遇到这种问题呢,尝试了各种办法,最近真是被愁死了,要P疯了。。。
20170516 HHV8 35 cycle.JPG 返回小木虫查看更多
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估计是酶问题?你是不是用的mix扩的?可以换个牌子试试,或者不用mix
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可以在超净台里试试,可能引物被污染了
气溶胶污染,换引物,在做下去也不会太好的。