双酶切为什么会形成假阳性呢 返回小木虫查看更多
长出来的很可能是空载体,而是在连接之前就没切开的,还很有可能是回收的时候不注意且下了未切开的片断,因为载体质量大,跑开时离加样孔很近。 做双酶切的时候一定要考虑好两个酶的酶切条件: 一、酶切温度是否一致 二、酶切的Buffer是否一致,虽然有时候有通用的Buffer,例如EcoR I和Bam I,用的通用的Buffer是K Buffer,但是有一个酶的120%的酶切效率的,一不小心就给切过了,时间很不好把握的,如果能分开酶切就尽量了!!! 三、酶切时间一定要把握好的,有朋友酶切时间长了多切下来了100bp。 相对来说,粘性末端的双酶切还算是比较好的。 还有抗生素不能高温长时间放置,
长出来的很可能是空载体,而是在连接之前就没切开的,还很有可能是回收的时候不注意且下了未切开的片断,因为载体质量大,跑开时离加样孔很近。
做双酶切的时候一定要考虑好两个酶的酶切条件:
一、酶切温度是否一致
二、酶切的Buffer是否一致,虽然有时候有通用的Buffer,例如EcoR I和Bam I,用的通用的Buffer是K Buffer,但是有一个酶的120%的酶切效率的,一不小心就给切过了,时间很不好把握的,如果能分开酶切就尽量了!!!
三、酶切时间一定要把握好的,有朋友酶切时间长了多切下来了100bp。
相对来说,粘性末端的双酶切还算是比较好的。
还有抗生素不能高温长时间放置,