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有人遇到过酵母表达蛋白出现包涵体的现象吗?

作者 gongxj03
来源: 小木虫 300 6 举报帖子
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用毕赤酵母表达一个高等生物的糖蛋白,重复了10来次,换过几个菌株,但是一直没有检测到酶活,
上清跑电泳也没有检测到蛋白。怀疑是形成了包涵体,有人遇到过这种情况吗?
请问如何分离包涵体? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • zhouxfd

    如果没有检测到蛋白说明蛋白没有表达,如果是包涵体一定能检测到

  • zhouxfd

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by gongxj03 at 2017-08-04 13:23:34
    意思是说如果有蛋白,形成了包涵体,在上清液中也是可以检测到的?
    ...

    包涵体在上请中没有,只在沉淀中有,你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀?

  • dellxiong

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-05 00:04:05
    包涵体在上请中没有,只在沉淀中有,你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀?...

    也有可能是没分泌出来,

    另,也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录

  • zhouxfd

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-05 10:20:38
    也有可能是没分泌出来,

    另,也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录!...

    如果没有加分泌肽应该不会分泌出来

  • gongxj03

    上清中没有,沉淀用液氮研磨后有蛋白,但是不确定是不是包涵体蛋白,担心是酵母自身的的蛋白。
    请问有什么办法分离酵母包涵体吗?

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