最近刚开始研究生实验,买了试剂盒提取RNA,按照说明书进行,然后测了一下浓度,太低,50左右。不知道哪里出了问题,希望大家能帮忙分析一下或是和我说一说提取RNA的注意事项!谢谢大家! 返回小木虫查看更多
注意事项: 1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。 2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 3.分层和 RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。 预期产量:1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为: 肝和脾 6-10μg ,肾3-4μg ,骨骼肌和脑组织1-1.5μg ,胎盘1-4μg ,上皮细胞8-15μg ,成纤维细胞5-7μg 。 常见问题分析: 得率低:A.样品裂解或匀浆处理不彻底 B.RNA沉淀未完全溶解 A260/A280<1.65 :A.检测吸光度时,RNA样品没有溶于水,而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高 B.样品匀浆时加的试剂量太少 C.匀浆样品时未在室温放置5分钟 D.吸取水相时混入了有机相 E.RNA沉淀未完全溶解,
我提取的是枣的果实,植物RNA提取,大家有什么经验或是建议吗?好难过,尝试了3个样了,浓度都是很低!
试试提高一下样品量,用研磨的方法试试
植物细胞有细胞壁,建议在液氮中,用研钵研磨,要研磨充分,注意的是,研磨后的样品粉末不要使其融化,超低温保存,在粉末状态下加试剂,提取RNA
注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和 RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
预期产量:1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为:
肝和脾 6-10μg ,肾3-4μg ,骨骼肌和脑组织1-1.5μg ,胎盘1-4μg ,上皮细胞8-15μg ,成纤维细胞5-7μg 。
常见问题分析:
得率低:A.样品裂解或匀浆处理不彻底
B.RNA沉淀未完全溶解
A260/A280<1.65 :A.检测吸光度时,RNA样品没有溶于水,而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高
B.样品匀浆时加的试剂量太少
C.匀浆样品时未在室温放置5分钟
D.吸取水相时混入了有机相
E.RNA沉淀未完全溶解,
我提取的是枣的果实,植物RNA提取,大家有什么经验或是建议吗?好难过,尝试了3个样了,浓度都是很低!
试试提高一下样品量,用研磨的方法试试
植物细胞有细胞壁,建议在液氮中,用研钵研磨,要研磨充分,注意的是,研磨后的样品粉末不要使其融化,超低温保存,在粉末状态下加试剂,提取RNA