DEAE Sephadex A50凝胶使用过程中发现的问题
A50凝胶使用前浸泡在0.01M NaOH中,第二次使用前采用枸橼酸盐溶液(pH 7.0)平衡凝胶时很难将pH平衡到位,始终维持在10左右,必须要采用PB缓冲液先平衡后才能将凝胶pH平衡到位。但是我在网上查资料的时候很多文献报道都提到用枸橼酸盐溶液平衡即可。我就搞不清楚了为什么别人能平衡到位,我的就不能了?还有就是将枸橼酸盐和凝胶混合后如果pH未到中性,用盐酸将pH调到中性算不算平衡呢? 返回小木虫查看更多
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A50凝胶使用前浸泡在0.01M NaOH中,第二次使用前采用枸橼酸盐溶液(pH 7.0)平衡凝胶时很难将pH平衡到位,始终维持在10左右,必须要采用PB缓冲液先平衡后才能将凝胶pH平衡到位。但是我在网上查资料的时候很多文献报道都提到用枸橼酸盐溶液平衡即可。我就搞不清楚了为什么别人能平衡到位,我的就不能了?还有就是将枸橼酸盐和凝胶混合后如果pH未到中性,用盐酸将pH调到中性算不算平衡呢? 返回小木虫查看更多
我们一般会用洗脱液先冲洗下然后再用平衡液平衡,这样会更快点!
听你的操作,是有些问题的。用氢氧化钠溶液浸泡后,要先用纯水过柱子清洗到流出液为中性后,再用平衡液充分平衡到pH和电导与样品一致即可上样。另外,如果你想在氢氧化钠溶液浸泡后快速洗到中性,可以配置低于0.01浓度的盐酸清洗柱子,到流出液为中性,再稍微用纯水过柱,之后再用平衡液。即使操作说明没有提用纯水洗,你也应该用的,这是基本操作。祝你顺利。
若用枸橼酸盐平衡需要20-40个柱床体积。因为氢氧化钠洗后,填料上结合了很多氢氧根离子,然后氢氧根离子要用枸橼酸盐全部置换下来,需要要20-40个柱床体积,若用Pb置换氢氧根离子就会快一些。
如果用高浓度的枸橼酸置换的话,会不会要快些呢?
还有注射用水连缓冲能力都没有,但是用水冲洗凝胶pH会比较快降下来,但是用枸橼酸盐溶液就不行,这又是啥子原因呢?
PB缓冲液如果加入枸橼酸离子和NaCl,那结合在凝胶上的是磷酸根、枸橼酸根离子还是氯离子呢
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