你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

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2楼: Originally posted by yubeihong at 2017-08-08 20:01:30
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁珠相比，具有低沉降速度和更佳的反应动力学
低聚集
----------------------
这个是磁珠的说明

引用回帖:

3楼: Originally posted by pineper at 2017-08-09 10:15:13
亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁 ...

1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素相结合的比例

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4楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 11:11:10
1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素 ...

1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵育的步骤，偏碱的就有聚集的现象，偏酸的就没有，这个影响大么？
还有离子强度，看有的材料说要用0.01M pbs，离子强度低，聚集现象减弱，不知道有没有影响
，

引用回帖:

5楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 11:54:36
1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵 ...

1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么cooh就可能和蛋白的Nh2端反应，专业特异性比较差
3 无论是偏酸还是偏碱，你可以直接检测一下你分离细胞的效果，顺便问一下，这个是国产的吧？

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6楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 16:09:07
1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么co ...

收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？

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7楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 16:46:49
收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？...

既然是进口磁珠，他们写的说明书比较详细，你先按照他的protocol做完以后检测一下实验效果，如果你不知道你的实验结果怎么样，我也不好判断你怎么优化！
另外，如果有成品cd45-beads，你可以用来做个对比，看看偶联效率怎么样
偶联效率和beads的粒径，悬浮沉降性，sa磁珠表面的封闭（对于化学发光来说这个非常明显，直接反应在本底值），bead的分散性以及beads 形状，当然还需要你实际实验中摸索合适的比例，祝好运！