荧光定量PCR加入的模板量应该是多少
想请教一下各位大神做荧光定量PCR反应实验时，按照说明书，反应体系是20微升，加入的模板量应该是多少合适呢？用内参基因actin还有其他的几个基因做了一下实验，actin基因的CT值在21左右，其他的几个基因的CT值也在20-25附近？
是根据CT值大小来决定模板用量吧？
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假如模板分子有一个，那么经过一轮PCR，就变成2个，这两个经过又一轮PCR，变成了4个，依次……，发现经过40轮，变成了2的40次方个，伴随着每轮PCR有荧光探针的水解，根据荧光情况判断原始产量，推算初始模板量。
我们实验室一般是用500-1000ngRNA做RT，然后得到20μlcDNA，加入85μl H2O，等于总体积是105μl, 每次做qPCR的时候总体积是25μl: 12.5μl SYBR Green Taq 2x +6.5μl H2O + 0.5μl primer1 10μM +0.5μl primer2 10μM + 5μl cDNA
反正这个条件下我们的qPCR都能做出来，你可以做个参考
偏差0.5左右为理想情况
，
楼主，想问一下，我内参的ct值都到35了，其他目的基因的ct值在21左右是正常的，内参基因是人家做同种物种用的，很郁闷