纯化蛋白质谱鉴定
真菌效应蛋白经大肠杆菌原核表达纯化后质谱鉴定,匹配出来的是大肠杆菌的蛋白,可能原因是什么呢?克隆菌株测序是正确的,表达菌株有问题吗?还是鉴定出错了?还是别的原因呢?对这方面还不太懂,希望得到有经验的朋友帮助,非常感谢!
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真菌效应蛋白经大肠杆菌原核表达纯化后质谱鉴定,匹配出来的是大肠杆菌的蛋白,可能原因是什么呢?克隆菌株测序是正确的,表达菌株有问题吗?还是鉴定出错了?还是别的原因呢?对这方面还不太懂,希望得到有经验的朋友帮助,非常感谢!
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实际没有表达
谢谢,可是我诱导表达后跑胶有目的条带呢,那条带不是大肠杆菌表达的吧
克隆对而且诱导以后有蛋白表达,应该就够确定转入的蛋白有表达。至于鉴定出大肠杆菌蛋白,有可能是你制备的蛋白样品不够纯,里面混杂了比较多大肠杆菌的蛋白,因此,鉴定到大肠杆菌的蛋白很正常。建议送蛋白鉴定前,跑胶分离蛋白,蛋白尽量分的开一些,另外制备样品尽量保证使用的器具,溶液都是干净无污染的。但是至于没有坚定到你表达的真菌蛋白,具体要看比对蛋白选用的数据库是否包含了真菌蛋白的数据库,不然是无法鉴定到真菌蛋白的。
嗯,谢谢,我切胶的时候可能污染了,可是检测出蛋白里面也没有我的目的蛋白呢
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