重叠延伸pcr的条件问题
希望将两个片段融合为一个片段，已扩增出单独的两个片段（两个片段有互补部分，约70bp）我的问题是，下一步如何融合？条件是什么？加的片段浓度要求是多少？
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京公网安备 11010802022153号
片段1的上游引物加片段2的下游引物，按正常体系加
方法可参考Nat Protoc. 2006;1(2):791-7.
PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences.
文章里用overlap pcr将小片段组装成较大的片段。
个人感觉片段割胶回收后，在体系里每个片段加20纳克就足够了。
片段之间的overlap至少要有20bp，在50-55度退火，
70重叠，应该很好做了，两个模版加的摩尔比为1:1即可，其他条件一致