原来设计的引物时候没太注意,今天拿出来要做了才发现,上下游引物Tm值相差8℃,一个50一个58,请问摸退火温度的梯度应该如何设置? 返回小木虫查看更多
取平均值上下也行
从55往下,2度一个剃度
经验是这个不影响,一般看产物的TM,引物只要GC值在许可范围即可。实在不行,做温度梯度PCR,看下结果
你可以一度一个梯度试试
取平均值上下也行
从55往下,2度一个剃度
经验是这个不影响,一般看产物的TM,引物只要GC值在许可范围即可。实在不行,做温度梯度PCR,看下结果
你可以一度一个梯度试试
那就是引物降解了,是不是用纯水溶的啊,最好用TE,避免反复冻融。如果这个引物一开始是可以做的话,那么可以考虑降解
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