关于内参引物的问题
刚准备做拟南芥的定量,内参引物是采取AtACT2序列设计的,但是普通PCR却未能扩增出条带,梯度什么的都试过了,都没有,我的RNA提取还行,浓度和电泳结果都显示可以,然后做了反转录,然后再去PCR的,结果就是没条带,我用的ACT2序列的CDS设计的引物,是不是应该用cDNA序列设计啊?但是我看文献里面设计的引物也是CDS设计的引物,应该是没有问题的啊,有没有大神给点建议,应该怎么做,我只有把内参基因能用PCR扩增出来了,才能去做定量啊,烦死了 返回小木虫查看更多
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以基因组为模板能扩增出内参基因吗
获得看家基因的两个方法:
1.借鉴已成功的实验例子,如搜索做real-time定量的文章一般都可以有发现。
2.做大量的实验验证,这个方法很麻烦的,
cDNA设计引物,重新PCR.