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CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA

作者 Sthunder
来源: 小木虫 300 6 举报帖子
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大家好! 有没有人做过CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA的啊?我用 1g/ml的CsCL浓度,13.5 ml quick seal tube, 50TI rotor, 35 000rpm 60 h 离心后发现条带跑到离心管的底部,上面有很小的一条开环,线性DNA条带,而且两带非常靠近。 将下面大的条带(已经在离心管底部)抽出后跑胶发现其中包含质粒DNA(三种形态都有)还有大量的RNA。也就是说各成分并没有完全分离。

如有经验丰富的大神还望多多指教如何才能获取高纯度DNA。 万分感谢!! 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • echo-lee520

    分子克隆有详细的protocol,1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的,在线性或开环的下面,具体分离效果情况依据,总质粒量,离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h,

  • echo-lee520

    分子克隆有详细的protocol,1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的,在线性或开环的下面,具体分离效果情况依据,总质粒量,离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h

  • ssykl

    您好,可否问一下您使用的CsCl是从哪个公司购买的,是什么纯度?需要灭菌吗?我自己也是新手做病毒纯化,什么都搞不清楚!非常谢谢您

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