碱法提取结合态多酚，吹干后100%甲醇复溶，测量总酚时出现沉淀
本人在提取结合态多酚过程：80%甲醇提取游离态多酚后的固体残留，再用4M NaOH 处理2小时。调pH 到2， 用乙酸乙酯萃取5次，氮气吹干乙酸乙酯，然后用100%甲醇复溶。复溶后的液体澄清（复溶时小心吸取清液）。
在用福林酚法测总酚时发现加了福林酚后出现浑浊（100uL提取液+200uL福林酚试剂），再加碳酸钠后白色沉淀（800uL) （图）。开始排除原因时发现：100%甲醇复溶后的提取液加水即出现浑浊，静止后白色颗粒。溶液调整至80%甲醇，过0.45um 尼龙膜得到澄清液，再加水或者福林酚试剂和7.6%碳酸钠依旧有浑浊。
自己还不是很清楚什么原因，但猜测是水不溶性的物质？乙酸乙酯吹干后是不是应该用水复溶？如果是为什么？求各位大神指点！
IMG_0218.JPG
返回小木虫查看更多
今日热帖
京公网安备 11010802022153号
多酚一般情况下的水溶性都是比较差的，
即使是配置多酚类标准品，有些都需要醇类先溶解后，再用水稀释。
谢谢！那我先稀释5-10倍再试。就是有点担心浓度稀释太大UV 读数太低。另：担心跑HPLC时也会析出颗粒（刚开始的流动相是0.05%甲酸水）。
或者你查一下各个溶剂的极性和非极性 换一种溶剂呢？ 我的一些实验步骤和你相像 做了一年多 从没出现过这样的情况 很好的问题
你是什么样品，是不是有脂溶性东西。
为什么 非要用乙酸乙酯萃取呢？样品很浑浊么？直接过滤不行么，然后调节ph到酸性。
如果是已经提取出来的多酚，水溶性应该是不错的啊，出现白色沉淀，感觉是脂溶性的东西被乙酸乙酯提取出来，浓度变大。
各位，搜寻到一篇文章：
“The Influence of Initial Carbonate Concentration on the Folin-Ciocalteu Micro-Method for the Determination of Phenolics with Low Concentration in the Presence of Methanol: A Comparative Study of Real-Time Monitored Reactions”
https://file.scirp.org/pdf/AJAC20110700012_31845055.pdf
“Moreover, an important F-C method drawback/limitation is that under some conditions precipitates can form. Consequently, it is necessary to resort to additional techniques, such as filtration or centrifugation, which are time-consuming and can sometimes reduce the blue col- our yield [3].
In order to prevent the precipitate formation, Singleton and Rossi [3] suggest accomplishing the assay at room temperature and not exceeding the 3% concentration of the sodium carbonate in the final mixture, although the initial carbonate solution to be used may be relatively concentrated (20%). Moreover, to obtain reproducible re- sults, Singleton et al. [14] suggest not exceeding the 1% alcoholic concentration in the final reaction mixture.
In this regard, a sample dilution is carried out to avoid problem of precipitate formation but, sometimes, no dilution of alcoholic extracts can be carried out because of their low phenolic content.”
我觉得可以解释白色沉淀的发生。但是还是不能解释我的甲醇提取液加水即浑浊。以及出现这种情况应该怎么办的问题，