灵芝多糖过DEAE Sepharose FF柱,梯度洗脱,测粗多糖分子量时,色谱图有多个峰……
我现在研究的是灵芝多糖纯化阶段,用DEAE Sepharose FF过柱,梯度洗脱后发现多糖在水相,0.1M,0.2M,0.3M洗脱部分组分比较大,分别取糖含量最高的管数跑hpgpc,发现每个洗脱部分的分子量范围都很大。按照文献上的,不是一般过完离子交换柱之后,过凝胶柱都是集中为单个峰?是什么方面的问题呢?而且最大分子量比较小只有10000左右。希望得到大家的解答和交流,谢谢。附上梯度洗脱图和测分子量的图像。
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洗脱图.png
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分离大分子我用的是DEAE-52,FF是凝胶阴离子吧,那大分子应该不到一个洗脱体积都下来了,水相多糖混合物很多,盐洗的应该比较纯
水相多糖洗脱下来的是中性(碱性)多糖混合物多正常,梯度盐洗脱为离子强度不同的酸性多糖,不过我在0.2M,0.3M,0.4M洗脱峰的hpgpc图像显示同样有很多分子量(更正一下上面错误的地方,梯度洗脱是在0.2M,0.3M,0.4M有比较明显的洗脱峰,其他不太明显的暂时不考虑),有点困惑???
如果你是要分子量1w以内的组分的话,再过个G10啊,一次分离一般都不会很纯的吧
我一般是过完离子交换柱,再过sepharose,再过Sephadex,每次都是在固定波长下测吸光度,然后判断分离组分的纯度,从离子交换柱分下来的组分再分个3到4个step基本上就可以分出来了。
问1:一般整个实验需要多长周期?得到多少克实验量进行结构分析?
问2:过离子交换柱的柱材是什么?是为了脱色吗?你觉得可以两次都上DEAE Sepharose FF吗?
问3:可以加一下QQ吗?我的:542695800,方便交流请教一下问题
最后,谢谢回复
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要是从粗多糖开始分,到你最后分到均一组分差不多2到3个月,结构再做两个月,基本上半年吧,这也是在你什么都不耽误的情况下!