做酵母也有好几个月了，但对有些细节还是把握不到位，结果不好，现在有些疑问还请大神支招。

如题，把线性化的bait载体 pAbAi-promoter转化进酵母，SD/-ura单缺板筛转化体，说明书是用clontech的insertion check mix 1检测成功重组的酵母细胞。按照说明书，mix里面一条引物在载体上，另一条引物在基因组上，两条引物正好夸过多克隆位点区域，可根据扩增片段大小判断。

我的疑问是：
1）线性化的bait转入酵母感受态细胞后，其存在状态有几种可能？
第一种可能，自然是整合到酵母基因组中的；
第二种可能，稳点的自连的环状质粒是否也可能存在其中（这种情况会影响后续实验吧）；
第三种可能，线性话的载体暂时存在酵母细胞中，但足以影响我们的PCR检测；

按理说按照说明书做是没有问题的，但是我用insertion check mix 1检测空的pAbAi载体，确实可以扩增出很亮的1200+的条带，这就让人不解了，明明没有酵母基因组，怎么也能扩增出条带？怎么排除上述的疑问呢？

2）有关AbA抗性的问题
我们都是按照说明书稀释以后涂板，各种浓度的AbA进行本底抗性实验，我后来联系到一个同样做酵母单杂的实验室，他们做的时候会把菌液稀释到OD0.6，然后10倍稀释不同OD后，涂在同一个抗性板上。按照我的理解，如果bait在300AbA是不长的，那么多大的OD值都应该不会影响这种结果。不知道这么做的意图是什么。还有就是在涂板的时候，为什么转化完的酵母不能涂原液，一定要稀释到不同浓度在涂板呢？


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