DAPI是否只有染色细胞核以后才能发出蓝色荧光
本人最近尝试着提取闭壳肌组织的细胞核,然后用乙醇固定,接着用DAPI染色,然后进行洗涤,最后在荧光显微镜下观察。观察的时候发现,视野里面有少许蓝绿色的片状荧光出现,开始认为是因为细胞核被DAPI染色了,但后来想想,有没有可能是一些残留的DAPI,虽然没有染色细胞核,但依然能够发出蓝绿色荧光?DAPI没有染色细胞核的话,是否在有些条件下也能产生蓝绿色荧光? 返回小木虫查看更多
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本人最近尝试着提取闭壳肌组织的细胞核,然后用乙醇固定,接着用DAPI染色,然后进行洗涤,最后在荧光显微镜下观察。观察的时候发现,视野里面有少许蓝绿色的片状荧光出现,开始认为是因为细胞核被DAPI染色了,但后来想想,有没有可能是一些残留的DAPI,虽然没有染色细胞核,但依然能够发出蓝绿色荧光?DAPI没有染色细胞核的话,是否在有些条件下也能产生蓝绿色荧光? 返回小木虫查看更多
我有用高分子来接着细胞 发现高分子也会被dapi给染色
DAPI 染的是核酸,不仅仅是细胞核才有。
目前常用的染核的就是DAPI和SYBR GREEN I 了,都用过,感觉差异不大,另,我们用的是3%的甲醛固定的,如果时间充足,可以尝试一下
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没洗干净的残余DAPI会发光,有时候确实不一定是染料,你描述的感觉是没染上
染核之后洗一下嘛,把背景洗掉
乙醇固定即使不染色也会发荧光的。比如我们做的石蜡切片的HE染色。放在荧光显微镜下,荧光信号很强。发现乙醇以及二甲苯可以让组织自发荧光
在细胞中,除了细胞核能够被DAPI染色外,有的时候叶绿体也能够被DAPI染色,这部分可以参考翟中和细胞生物学第四版,图6-11(P95).尽管动物细胞里面没有叶绿体,但其它的细胞器或者核酸等细胞核外的杂质也有可能被染色.
DAPI是染料,紫外激发就会发蓝光,要去除背景、非特异,需做好封闭,洗涤工作。