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真核基因在原核表达系统中表达

作者 18081475188
来源: 小木虫 150 3 举报帖子
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需要建立一种动物特定蛋白的原核表达系统,直接从该动物基因组中克隆编码该蛋白质的基因,构建载体,转入大肠杆菌中表达生产是否可行?说明原因,如何检测判断大肠杆菌是否成功的实现了该蛋白的表达

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    你说的这个实验思路现在用的很多很多,基本上都是这样做的,属于比较常用的思路。你说从动物基因组中克隆该蛋白质的基因理论上是可行的,但其实你的目的不是这个基因,而是表达蛋白。所以你克隆出的基因序列是可以做优化的。不知道你的基因大概多长,因为真核的蛋白到原核体系表达肯定会有各种各种说不清楚道不明的问题。如果你的基因不优化好,后面可能会遇到各种各样的问题,比如表达量不高,包涵体表达,甚至因为某些原因不表达也可能会出现。记住一定要从序列开始优化,密码子的简并性~等,这个建议你找个专业的公司帮你处理一下。需不需要加标签,这个跟你后面的实验有关系,一般都是要加的,方便后期的纯化和检测表达。后面构建出来载体就简单啦。
    养大肠,多个几个培养时间,处理方式跑一下蛋白胶看看哪种条件下表达量高!

    最最重要的问题就是你要这个蛋白的实验目的是什么!原核表达的蛋白能不能实现你这个目的,

  • xuyuzhi

    找我,我们公司专做合成的,7毛/bp

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