我的也出现这种状况

是连接不上还是转化不进感受态啊？？？这两个问题您都说了是都遇到了吗？
目的片段和载体酶切回收之后测一下浓度，连接时候3:1的含量连接。
转化这种问题我也遇到过，连接测序都无误之后就是没法转到农杆菌感受态里，别的基因可以，我这个不行，目的片段换载体连接再转化也不姓，换了别人帮做也不行。最终是换了一种感受态就行了。。。。。最终也不知道之前失败原因是啥，建议楼主不要纠结原因，换一下载体试试，不行再换一下感受态试试，

你insert和vector 都切的没问题的话。你链接条件试一下，先16度（泡在水里）连1h，然后室温3h，然后转化，转化冰域1h，复苏一个半小时，然后全部涂板。

不然换一下solution 1，虽solution 1号称室温1h搞定，但是我连接都会连很久，毕竟一开始的低温有利于DNA环化，后面室温利于酶活性的链接。这样板上的克隆也明显多一些。