最近在做Western Blot但是一直没有条带，不清楚是什么原因导致的。
之前考染（配方见下图）是一片模糊的，现在丽春红（于公司购买）染色也没有条带，到底是什么原因呢？
请求各位大神的帮助····
平时跑胶先是85V，20min然后转135V，50-70min；
转膜80V，2h；
5%脱脂奶粉封闭室温摇2h；
一抗目的1：500稀释，内参1：1000稀释，4℃过夜；
PBST洗涤3次，每次8min；
二抗1：1000稀释，室温摇2h；
ECL显色。
今年四五月份时，差不多也是这个体系能出内参条带，但是没有目的条带，现在是内参目的均无条带。。。
做了几次了，很崩溃。。


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