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刚入学的菜鸟,关于实验操作,快得思想病了,您的只言片语,也会对我有帮助!

作者 xyz_su
来源: 小木虫 1200 24 举报帖子
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本人今年研究生入学,现在开始做实验了,我们是做分子生物实验,免疫病害相关,虽然是属于比较简单的一种,但是最近的我真的是充满了不安,疑惑,以及不知所措,还希望能够得到前辈的热心指导交流,因为我真的不知道该怎么去做了

关于实验方面:一、一些基础操作感觉自己做的不够规范,最重要的是灭菌,保证无菌,很多小细节我不知道我做的对不对,比如1有时在从-80冰箱中取出菌种进行摇菌,接种的过程中,虽然菌种管还没有融化,菌种管的盖子已经打开了,此时,菌种管倒在了超净工作台台面上,我也不知道,这菌种管的还能不能用,有时可能是不小心碰倒了,菌种管的液体刚要流出一点,扶起来了,我也不知道这个还能不能用,对于这些小问题很纠结,而我又是个疑心重的人,总感觉自己平常不注意的话,再把自己保的种给污染了,2我摇完菌以后,放置在超净工作台中呆了大半天,后来我做实验中又疑心别在此过程中污染了菌,做的实验结果就不是这个菌的了。3超净工作台的事情,我们实验室的超净工作台好几个月才用紫外线杀一次菌,基本上都没有开过紫外,我在想别的学校实验室也是这么久吗,我感觉,这样怎么保证是无菌的呢?4超净工作台使用的时候一定要开风机吗?我知道开风机的作用好处,但是这个是一定必须要这样做吗?我也不知道,师姐这样告诉我要开我就开了,可是我不知道是不是必须都要每次开,我感觉我自己做实验很多小细节我不知道为什么要这样做,心真的很累,感觉自己就像是个傻子,不知道原理缘故,单纯的去照做,或许人家农民工告诉他怎么做比我做的还要好,5,我倒平板的时候,第一次倒LB的时候倒得慢了,有气泡后面倒得就快要凝固了,第二次我就在固体LB融化好后,在很热的情况下倒平板,因为很热,我带了棉织手套,我又想这手套肯定也可能会有细菌,我这样不就有可能染菌了吗?还有我倒完了板,我是通风橱里又加了风力,为了让平板快些凝固,我不知道这样加风力对不对?6我倒平板后,我当时到的时候是挺热的,肯定这LB是液体的,所以,平板内的LB肯定应该是均匀的厚度的啊,但是我平放培养时,不知道为什么后来在看的时候,变成了我上面两张图那样,一边的培养基厚,另一边的却很薄,而且有时感觉很薄,清洗的时候都整不下来,像烤干了一样,我放平板的是有两批,一组是28度,没有出现这种情况,一组是37度,出现这种情况的多,第一张图是不知为何边上有磕刻,倒完应该是很一致的平面的啊,为什么会有这种情况,还有有的无缘无故的裂开一道,其余看着正常,为什么培养基边上会裂开一道呢?

我觉得我自己快要完了,整天都是疑心疑鬼的,这些基本的小细节,让我纠结的要命,关于实验严谨的观念还有一些最基本的操作我都有问题,老师也不管我,也不知道老师天天忙什么,一问老师,老师就让我问大师姐,而我的大师姐她不太善于表达这些细节,一般都是让我看她怎么操作,可是到我自己做,问题就是一大堆了,比如哪个是否是必须要这样做,姿势是什么之类,我观看的时候就是Get不到点,也不知道有没有这样的书,能够解救一下我,我觉的我做实验实在是太不专业和规范了,也是不明原理,

在此,诚恳的请教前辈大神们分享指导一下我这个迷途的人儿,分享一下做实验的经验,谢谢啦,您的只言片语,也会对我有帮助!

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  • 精华评论
  • 前行的璐

    首先,把心态调整好,不要想多,不然会很累的,这才研一,不懂的地方可以问师姐师兄,基本操作问老师的话基本上老师不会回答你这些的,也可以先找本实验操作的书,比如《分子生物学实验》等,有很多了。
    具体你的问题,1  “有时在从-80冰箱中取出菌种进行摇菌,接种的过程中,虽然菌种管还没有融化,菌种管的盖子已经打开了,此时,菌种管倒在了超净工作台台面上,我也不知道,这菌种管的还能不能用,有时可能是不小心碰倒了,菌种管的液体刚要流出一点,扶起来了,我也不知道这个还能不能用,”菌种管最好不要碰倒,既然怕污染,那下次做的时候就小心点,
    2.超净工作台的事情,我们实验室一般是用之前半小时开紫外线照射,灭菌,用的时候是开风机的
    3  倒平板,一般50-60度的温度可以倒平板了,倒的时候要均匀,你的板子是不均匀厚度,倒完后可以放在超净台十来分钟,如果可以的话(别人暂时不用台子),半小时凝固了,具体操作楼上有的讲的很清楚了

    最后,分子生物学实验多做就好了,加油,

  • 酷莱博

    小伙子,你的事很严重啊。我不知道咋耐心把你这luolibasuo的长篇大论看完的。实验没那么严格,所有的实验方法都只是工具,不要太当回事。失误,粗糙都没啥事。不是错误就行了。菌种一般没啥事。你不用超净台也没事,不开紫外也没事。一般pcr之类,细胞培养之类的控制污染严格度比这个细菌高多了。小伙子,自信一点。不行就所有有怀疑的就当场解决。拖拖拉拉,做到最后一步还是不自信。

  • Rose56882

    首先你的板倒得太薄了,一般一瓶培养基100ml我只倒5个板,其次你没用封口膜封上接菌后,在这个要在超净工作台里操作,提前开紫外灭菌30分钟,大风吹15分钟,转小风操作

  • 杨箫羽啊

    多看看步骤熟悉熟悉就不会那么慌了,而且你对自己要求可能比较高,这样挺好的,慢慢来

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