GC-MS测定水稻叶片代谢物的前处理
各位虫友,大家好
本人目前在提取测定水稻叶片的氨基酸、糖类等代谢物,是新手。经过查文献后,提取方法为提取液(甲醇:氯仿:去离子水 = 2.5:1:1)70℃水浴15min,用GC-MS检测不到东西或者只能检测到吡啶。现在将具体步骤列下来,请问是否哪些步骤有问题或有细节没有注意到。我自己在提取过程中遇到的疑惑附在最后,求解答,谢谢!
提取步骤:
1 将植物鲜样用液氮研磨成粉末,称取0.1g粉末于2ml离心管中。
2 向离心管中加入1.5ml提取液(甲醇:氯仿:去离子水 = 2.5:1:1)。
3 向离心管中加入50μL的核糖醇(0.2g/L),按上盖子。
4 离心管涡旋10s。
5 离心管在70℃水浴15min。
6 离心管在4℃下,12000g离心10min。
7 取200μL的上清液于液谱瓶中,氮吹干。
8 向液谱瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸盐(20mg/ml,溶于吡啶),37℃恒温箱孵育2h。
9 向液谱瓶中加入50μL的MSTFA,37℃恒温箱孵育2h。
10 向液谱瓶中加入870μL的甲醇溶液,使得溶液体积达到1ml,气相质谱待测。
问题
1 70℃水浴时离心管是否盖盖子,如果盖盖子的话水浴时会崩开,不盖的话溶液会挥发。
2 在经过甲氧胺盐酸盐和MSTFA孵育后,液谱瓶中溶液只有130微升,是否需要加入甲醇使得溶液体积高一点(加甲醇这一步是小老师建议的,在文献中没有看到过)? 返回小木虫查看更多
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我们提取苹果叶片挥发性物质是避免高温的,我们是用超声萃取,20摄氏度,半个小时。还有你的那一步氮气吹干是不是也是挥发性物质减少的原因之一。我也是刚刚开始做,说错了不要介意哦。
不要见笑,刚才看清楚你提取的物质并非是挥发性物质,请见谅
谢谢你!我想请教一下你做叶片挥发性物质的超声提取方法。因为我这个提取方法里也有用超声提取的,我试过用室温超声,但是总会把离心管盖子给崩开
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顶一下,求助呀
老铁,我最近想用GCMS测糖酸,想交流下样品前期处理方式,可以留个其他联系方式不