前辈们，这个情况遇到过么？
从提质粒，反转录，pcr，连T，转化，涂板，挑菌，菌落pcr，摇菌，提质粒，每个过程都有条带，也都在目的条带区域。提质粒测序回来，却没有目的条带，非常非常不解，而且做了两次，都没有目的物，两个多月，一点成就都没有！跪求大神帮分析
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质粒测序前做了简单的验证吗？比如酶切，是否有目标条带？
可能是目的条带根本就不在质粒上呢
先酶切，确定连进去了再测序。另外，如果你的片段比较长，建议连接的时候用pcr仪控温，16度过夜连接。
感觉这么做程序不对，测序可能当天不能知道结果，等待的时间长，还要花钱测序；直接酶切，跑个胶就能看结果
，