求大神PCR实验交流
用于PCR的引物退火温度根据公司的温度设了一个梯度，结果还是没有看到目的条带。后来发现公司给的温度与设计引物时的温度有差距，到底是以NCBI中提供的温度为准呢还是以公司提供的温度来摸退火温度。我的产物是498bp，可是图中看不到目的的条带
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那就试试NCBI的吧
恩
你现在的退火温度设置的是多少？我的建议是你把上下游引物的退火温度加起来后除以2然后再减去5度你尝试一下希望对你有所帮助，
因为你这个是段片段。温度设置时建议还要考虑模板DNA的问题，DNA片段较复杂温度普遍较复杂，综合考虑吧