当前位置: 首页 > 生物科学 >PCR扩增的片段,可以不经酶切直接作为目的基因与载体进行连接么?

PCR扩增的片段,可以不经酶切直接作为目的基因与载体进行连接么?

作者 Korea??
来源: 小木虫 500 10 举报帖子
+关注

扩增的片段一般为平端,连接率很低吧?

 返回小木虫查看更多

今日热帖
  • 精华评论
  • 快叫爸爸666

    肯定要酶切啊,不然不互补,你让它怎么连接

  • drwhoknowss

    可以啊,平端对平端就可以了。不过你要跑胶纯化一下,否则连上的都是引物二聚体

  • drwhoknowss

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by Korea?? at 2018-01-13 19:50:52
    我的载体酶切后,和PCR扩增产物一起跑胶提纯了,也就是说我的载体也应该是被平切了吧?但是连接效果不理想啊,应该引物二聚体很多。

    ...

    要保证你切质粒用的酶能产生平端。还有要用高保真酶,普通taq酶会自动加一个A,不是完美平端。
    最后这种平端对平端,不能保证方向。所以50% 的可能DNA在质粒上是反的,不过有时候不重要,看具体情况

  • Korea??

    还有这么多问题哦

猜你喜欢
下载小木虫APP
与700万科研达人随时交流
  • 二维码
  • IOS
  • 安卓