高gc含量，3kb片段，电泳无果
用的金唯智的高保真酶，扩增不出来片段。用mix能扩增出来，但杂带很多。第一张图都是高保真酶扩增的，有带无带引物设计不同。没加gc或Dmso，第二张图是mix扩增的梯度，有带很亮。我的目的是想用高保真酶扩增出单一的条带，或者非特异性条带很少的那种
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看来都是来领金币的啊
高保真酶扩增试试
NEB的Q5 thermo的phusion试过没 mix有条带 连个t载体 优化下模板再试试
用toyoba的 kod fx 试试吧。贵，好用！
把对的那条带切出来胶纯化后作为模板再pcr一次
kodfx可以搞定
如果在DNA模板上扩增，用PFU酶大部分都扩增不出来，因为pfu酶保真性高，扩增效率低。 想要保持高保真高效率，kod-fx 最好，价格比较贵，可以试试takara的含高GCbuffer的聚合酶，如LAtaq 或者 primerstar with GC buffer，