fastapfu和taq酶做菌落pcr
之前的片段是用fastpfu,退火温度52扩增的,转化大肠之后,用taq酶做菌落pcr,挑了所有的白色菌落都没有条带,怀疑是退火温度和变性时间的问题,修改之后,变性时间改成5min,退火温度试了55,52都没有条带,请问这是怎么回事啊?如何解决啊,不可能是所有的菌里都没有我的片段吧?
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之前的片段是用fastpfu,退火温度52扩增的,转化大肠之后,用taq酶做菌落pcr,挑了所有的白色菌落都没有条带,怀疑是退火温度和变性时间的问题,修改之后,变性时间改成5min,退火温度试了55,52都没有条带,请问这是怎么回事啊?如何解决啊,不可能是所有的菌里都没有我的片段吧?
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有可能,你的基因gc含量过高或者at含量过高
我的转换白菌里到现在为止,已经培养了40个菌株,小提的DNA鉴定,至今没发现我的目的基因
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我直接提质粒,但是质粒酶切后没有目的基因。有载体,但目的基因一直没出现过