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__tangtang__

新虫 (小有名气)


[求助] 求问物质紫外吸收峰面积变化的问题已有1人参与

我最近在做一个测酶活性的课题,用的仪器是毛细管电泳,检测方法是紫外检测,用产物峰面积变化来反映酶活的变化。但是试验过程中遇到了一个比较奇怪的问题:在测定产物峰面积随反应时间变化情况时,发现底物峰面积随着反应时间的增加而增加(正常应该是随着反应时间的增加底物峰面积减小,产物峰面积增加)。
之后也测了底物和产物随着时间变化各自的紫外吸收稳定性,结果它俩随着时间的增加紫外吸收都挺稳定的,排除了底物和产物随时间变化发生结构转化的原因。底物的最大吸收波长是在270nm,产物的最大吸收波长在400nm,我实验过程中用到的检测波长是230nm,因为在230nm能同时检测到底物和产物的吸收。后面附了底物和产物的紫外扫描图,希望大家能帮着看看。
这个问题现在很困扰我,想问一下有虫友遇到过同样的情况吗?课题卡在这走不下去了,请求虫友们的帮助,能帮着分析一下吗?

求问物质紫外吸收峰面积变化的问题
底物紫外吸收示意图.png


求问物质紫外吸收峰面积变化的问题-1
产物紫外吸收示意图.png


求问物质紫外吸收峰面积变化的问题-2
底物和产物混合后的紫外吸收示意图.png
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gyzyxy

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好,你的问题解决了吗?我也遇到类似的问题:做一个酶学反应,最后用LC/MS/MS测底物和产物的含量。在测定产物随反应时间变化时,发现底物的总体变化趋势是随着反应孵育时间的增加而增加(问题1)。最短孵育时间和最长孵育时间的底物有很明显的差异,但产物却测不到,低于定量下限(问题2)。
2楼2024-05-06 13:38:52
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