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水凝胶浸提液做细胞毒性实验 需要加入多少培养基？浸提液浓度要求？
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请问大家做水凝胶浸出液，测细胞存活率是用的多少体积培养基浸泡水凝胶？有没有浓度要求？看文献也没有写加入具体的培养基体积。 我现在用水凝胶的体积是0.6ml，用2.4ml不含血清培养基浸泡，37℃浸泡24h，也就是V水凝胶：V培养基=1:4，之后再补加10%血清（其实也不确定是不是应该直接用含有血清的培养基浸泡），然后用100%水凝胶浸出液和50%水凝胶浸出液（100%水凝胶浸出液稀释一倍）培养细胞24h和48h，但是细胞存活率很低（100%水凝胶浸出液细胞存活率只有50%左右，50%水凝胶浸出液只有70%左右），但是我要证明我的水凝胶是细胞毒性小的，细胞存活率应该至少>80%，所以是不是我的浸提介质（加入培养基）体积太小了，导致细胞毒性这么大，我看相似的材料别人的细胞存活率都是>80%，但是他们没有写加了多少浸提介质。我是不是应该提高V水凝胶：V培养基=1:10？但是这样稀释倍数太大，可能没有很大说服力，所以还是想知道大家是怎么做的，或者有没有一个公认的标准？ 看了一下ISO10993-12，没有对水凝胶浸提介质有明显要求，但是应该是用不规则的多孔材料的那个标准，即0.1g/ml的浓度，但是不太清楚怎么得到这个浓度，因为我的水凝胶是可注射的水凝胶，难道要成水凝胶后再拿出细胞房称重吗？ 还是直接把培养基的密度近似于水的密度1g/cm2，然后通过m=ρV，计算水凝胶质量？0.6ml水凝胶近似0.6g，需要加入6ml培养基浸泡。 还是直接用水凝胶含有物质的重量计算0.1g/ml，但是如果这样我的水凝胶只有36mg的原料，然后形成0.6ml水凝胶（即水凝胶浓度为60mg/ml），如果是按照0.1g/ml计算需要加入浸提介质会很少（只需加入0.36ml浸提介质）肯定不对。 浸泡前水凝胶都是完整的一块水凝胶，但是浸泡24h后出现两种情况：情况1：水凝胶完全溶解，培养基体积＞2.8ml，情况2：水凝胶不溶解或者部分溶解，并且吸收一半培养基，最终得到培养基体积<1.5ml。 跪求大家的解答，或者分享一下你们的做法也很好，非常感谢！  水凝胶浸提液.png |
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