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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


[资源] 荧光素(FITC)标记蛋白质

利用某些物质对蛋白质标记从而对其进行检测分析的方法有多种,
常用的方法有同位素标记,荧光标记等。

同位素标记对人体危害较大,同时也需要配备特殊仪器,故目前该法使用较少;
但它可以达到定量检测分析的目的。

使用更为广泛的是利用荧光素对蛋白质进行标记。
它的主要原理是利用FITC(异硫氰酸荧光素)上的N=C=S基团和蛋白质上游离的-NH2发生化学反应,而后在特定波长光源的激发下即可观测到荧光信号。

常用检测仪器:
  普通检测用的荧光显微镜、更高级的可以用激光扫描共聚焦显微镜。


在小木虫上查了下,还没有看到关于FITC标记蛋白质具体适用操作过程的帖子。
附件是我利用FITC标记蛋白质(BSA)的实验操作过程,详细具体,绝对原创。
希望对大家有所帮助。

[ Last edited by amisking on 2010-6-9 at 19:36 ]
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


“用透析法来荧光标记蛋白”,这个我不是很明白~~希望能说得清楚些。
我在进行荧光标记蛋白质的过程中,最后一步用Sephadex G-50葡聚糖凝胶将BSA-FITC, BSA, FITC分离开,以收集较纯的BSA-FITC,感觉效果还不错。

具体还有什么疑问请QQ联系:346802296
12楼2009-10-20 11:14:49
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maomao809920

金虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

刚好就要做这个了 谢谢~~!!!
37楼2011-07-14 19:00:56
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


那么多人看终于等到有人回帖了~~
不容易啊!!
3楼2009-08-29 14:30:28
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普通回帖

scsgp

木虫 (职业作家)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

谢谢
2楼2009-08-24 00:03:23
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xiaorujing


请问这与GFP完全是平行关系的两码事吗?
4楼2009-08-29 19:04:07
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


不是一回事~~
5楼2009-08-31 21:26:56
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bioman9810

木虫 (著名写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

谢谢,学习...
6楼2009-09-04 10:07:06
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小神300

新虫 (初入文坛)


最近刚好要做这方面的实验,用荧光染料标记蛋白,正在选荧光染料中,
想请问一下,在选择荧光染料的时候有没有特殊的要求,因为我的蛋白标记后还要继续作用细胞,所以想荧光标记蛋白后对其本身的活性影响不是很大,不然就无法继续下面的实验
另外,不知楼主对bodipy系列的染料了解多不多,看了文献,好像bodipy系列的染料相比较FITC类的对ph要不敏感,应该有取代FITC的趋势。
,期待回复~~~。谢谢!!!!
7楼2009-10-15 15:40:50
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


1. 关于荧光素的选择:
    选择荧光染料的时候没有什么特殊的要求,只要能将蛋白质染上颜色且能用相关仪器进行检测即可。

2. 荧光标记蛋白后对其本身活性的影响:
    严格来说,只要对蛋白质进行过处理后,或多或少都会影响其生物性能。但一般的处理影响不大,若实验对蛋白质活性要求不是很严格的话,这种影响可以忽略。

3. 蛋白标记后继续作用细胞:
    据以上观点,对蛋白质进行标记后还可继续作用于细胞。但在检测时应注意细胞对荧光信号检测的影响。

4. 关于bodipy系列的染料:
    我对这类染料了解不多,不敢妄加评论~~见谅。
    FITC是一类使用很广泛的荧光染料。
8楼2009-10-17 10:33:54
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rava

金虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

FITC的确对环境的pH较为敏感,特别是羧酸根的质子化会明显降低其荧光量子产率。不过人们标记FITC除其荧光性质外还可以利用其免疫作用,仅就其荧光性能而言FITC远不是最好的。bodipy有丰富的修饰种类,荧光性能调节范围很宽,而且稳定。
9楼2009-10-17 10:52:04
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


有见地~~
有增长了些知识!
10楼2009-10-18 15:00:52
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小神300

新虫 (初入文坛)


谢谢gan01204和rava的回复,不好意思,过这么多天才来道谢。
想再问下楼主,你有用过透析法来荧光标记蛋白没,这种方法效率高不高的
11楼2009-10-20 11:00:01
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caj101

银虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

本人专门做bodipy的染料及其功能分子,对其合成很了解。不过对于生物学应用知道的不是太多,想请教一个问题:细胞培养结束后,如何将细胞内的酸性降低到7.4附近?是否应该在细胞培养阶段就应该加以控制?谢谢!
13楼2009-10-23 20:40:45
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


回复“caj101 ”

我不是做细胞的,对于你这个问题也不好回答~~
问了相关人士,答复如下:
若想将细胞内的PH值调至7.4,可以在培养结束后重新将细胞培养于PH=7.4的细胞培养液中一段时间,从而可使细胞内的PH值接近7.4~
14楼2009-10-24 14:07:51
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lanfenfei

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by gan01204 at 2009-10-17 10:33:54:
1. 关于荧光素的选择:
    选择荧光染料的时候没有什么特殊的要求,只要能将蛋白质染上颜色且能用相关仪器进行检测即可。

2. 荧光标记蛋白后对其本身活性的影响:
    严格来说,只要对蛋白质进行过处理后, ...

这些知识对我太重要了,感谢楼主!!!
15楼2010-03-22 15:18:46
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wujing11778

金虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

非常感谢!
16楼2010-06-01 22:24:43
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85715623

木虫 (正式写手)


★ 一星级,一般

好,顶!
17楼2010-06-02 07:27:22
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onlyjianli

铜虫 (初入文坛)


谢谢,学习了
18楼2010-06-04 15:40:14
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weiyanbme

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by gan01204 at 2009-07-18 15:53:47:
利用某些物质对蛋白质标记从而对其进行检测分析的方法有多种,
常用的方法有同位素标记,荧光标记等。

同位素标记对人体危害较大,同时也需要配备特殊仪器,故目前该法使用较少;
但它可以达到定量检测分析的 ...

下不了,白白浪费了一个金币啊
怎么回事
楼主能发到我邮箱里么
谢谢了哦
weiyanbme@gmail.com
19楼2010-06-04 16:08:54
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gan01204

至尊木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by weiyanbme at 2010-06-04 16:08:54:


下不了,白白浪费了一个金币啊
怎么回事
楼主能发到我邮箱里么
谢谢了哦
weiyanbme@gmail.com

已经发送至你邮箱了~~
20楼2010-06-09 18:06:29
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zengfuxing

银虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

好东西,学到了
21楼2010-06-09 19:15:08
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二氧化钛

金虫 (小有名气)


我下不了,麻烦楼主给发一个,不胜感激
22楼2010-06-22 15:07:40
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月下独酌

木虫 (著名写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

很感谢楼主
23楼2011-01-13 23:56:23
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xhjggl

木虫 (正式写手)


★ 一星级,一般

上海生工有代理进口的试剂盒卖。

HOOK™ Dye Labeling Kit (FITC)
蛋白FITC荧光素标记试剂盒       
Description:
FITC (fluorescein isothiocyanate) is a commonly used fluorescent label for proteins, as it contains the groups required for conjugating to amino, sulfhydryl, imidazoyl, tyrosyl or carbonyl groups of proteins. FITC has a molecular weight of 389, and excitation and emission wavelengths of 494nm and 520nm, respectively, therefore emitting green visible light.This kit utilizes Tube-O-Reactor™, which allows for the reactions to be performed in a single tube, with no loss of essential reagents and minimum hands-on time and effort.
Features:
Dye preweighed and supplied in single use  vials (Also available separately);Suitable for most proteins;Utilizes single Tube Reactor for minimum hands on time.application for Labeling of a green fluorescent dye to proteins and peptides. And Suitable for antibody labeling. Store: -15~-20℃
编号        包装        价格        产地
786-059           5 Reactions        2,709        GBios
24楼2011-01-14 13:41:16
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gylu

金虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

好东西,谢谢啦!
25楼2011-01-26 23:39:47
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luona

金虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

谢谢,学习学习。
26楼2011-01-27 03:01:01
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

好贴呀,我帮你顶一下啦
27楼2011-02-08 06:45:39
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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)


多谢分享
32楼2011-06-18 10:43:31
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q307078056

银虫 (正式写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

哎呀,这可真是。。。   不是我的领域,看起来真吃力
33楼2011-06-21 23:41:03
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oasisleu

捐助贵宾 (初入文坛)


★★★ 三星级,支持鼓励

为什么不能下载
36楼2011-07-09 20:07:12
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karin

木虫 (小有名气)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

很好
39楼2011-09-21 10:06:17
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晚香玉

木虫 (正式写手)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

好东西,一直在寻找!
42楼2011-09-28 15:04:39
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小丫的维尼熊

木虫 (小有名气)


★ 一星级,一般

谢谢。继续努力,加油。
43楼2011-09-28 16:33:17
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lvye3707

金虫 (正式写手)


★ 一星级,一般

谢了
45楼2011-09-29 11:11:58
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简单回复
leewolf28楼
2011-05-13 10:10   回复  
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ggqi29楼
2011-05-17 09:37   回复  
五星好评  顶一下,感谢分享!
2011-06-18 09:57   回复  
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2011-06-18 10:41   回复  
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delmar34楼
2011-06-23 19:30   回复  
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2011-06-25 18:06   回复  
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悦迷00838楼
2011-07-15 10:32   回复  
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pplu032940楼
2011-09-21 16:59   回复  
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dreamerfei41楼
2011-09-27 02:37   回复  
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churanran44楼
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hallhowe46楼
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cainiao12347楼
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hqwzj198748楼
2011-10-24 16:41   回复  
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hqwzj198749楼
2011-10-24 16:42   回复  
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haodj50楼
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