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MSC细胞培养说明
脐带间充质干细胞是一种能分化成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。其具有强大的增殖能力,且参与构成造血微环境,因此被广泛应用于组织工程,细胞治疗和基因治疗。
操作指南
常见问题
许多科研小伙伴,在培养MSC细胞时,可能会遇到一些问题,在这里小逸为大家梳理一下
MSC细胞培养操作指南
希望对老师们有所帮助(有需要采购可以看本人介绍)
产品参数
01
MSC细胞基本信息
MSC人脐带间充质干细胞
名称:MSC人脐带间充质干细胞
来源:脐带
特性:贴壁生长
形态:梭形细胞样
来源:IMMOCELL
支原体:无
推荐传代比例:1:3至1:5
推荐换液频率:2~3次/周
冻存液:无血清冻存液,液氮储存
规格:5x10^5cells/T25
培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
MSC细胞培养基
人脐带间充质干细胞
完全培养基
流式鉴定&三系分化结果图
MSC细胞流式鉴定结果图
成脂
成骨
成软骨
到货处理
02
MSC细胞收货处理
复苏细胞T25瓶
复苏MSC细胞
1.收到MSC细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生及时和我们联系;
2.用75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h,显微镜下观察细胞状态;
3.给收到的细胞拍照(10x,20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
收货注意事项
1.如果使用培养瓶,在将其放入培养箱前,应将封口膜去掉,瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换
2.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致
培养指南
03
MSC细胞培养操作说明
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MSC细胞复苏步骤
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。
第二天换液并检查MSC人脐带间充质干细胞密度。
请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
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MSC细胞传代操作
如果MSC细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若MSC人脐带间充质干细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
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MSC细胞冻存步骤
待MSC细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
1.收集MSC人脐带间充质干细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,然后进行细胞计数。
2.根据细胞数量对应加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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温馨小贴士
1.为防止回收培养基时操作造成污染,运输用的培养基(灌液培养基)建议不再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞
2.收到细胞后第一次传代建议1:2传代
常见问题
1、何时须更换培养基
视细胞生长密度而定,常规细胞2-3天更换培养基。
2、何时进行传代
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养
首次传代建议1:2传代,就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。
3、细胞冻存浓度是多少
1*10^6-1*10^7之间都可以。
4、冻存细胞数量计算
如果是有要求每管要冻多少细胞,那就用1ml完培重悬后,取部分按平时方法计数,剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可
如果没要求,那就按平时,一个皿冻一管。
5、可否使用与原先不同培养基
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,易造成细胞状态不好,最终造成细胞无法存活。
6、可否使用与原先不同血清种类
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
7、影响细胞长得慢因素
A.没有保证密度,细胞长不起来
B.操作时力度没控制好,将细胞吹碎,状态变差
C.血清质量不好,影响细胞生长
8、贴壁不牢的细胞到货处理流程
A:到货后先稳定4-6小时 将培养瓶内全部培养基收集到50ml管内,再用pbs润洗,pbs也收集到50ml管中。将上述上清1000rpm离心3min后,去上清,加入pbs重悬细胞沉淀。1000rpm离心3min后,去上清,加入胰酶1-2ml,重悬细胞沉淀,静置1-2min,加入2-4ml完培终止消化1000rpm离心3min后,将细胞铺到新的6cm皿或T25瓶中,镜下观察如有成团细胞,轻轻吹开即可。
B:T25瓶内贴壁细胞按正常步骤操作收集细胞即可。将A和B都一起铺到同一个皿里摇匀后,放培养箱培养。 |
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