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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB实验蛋白印迹形态非常不规则
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)

[求助] WB实验蛋白印迹形态非常不规则

大家好。本人快开题了，最近在做WB检测内源性蛋白的时候，使用15％蛋白胶，半干转PVDF膜，5％脱脂乳封闭1小时，一抗孵育1小时，2抗孵育1小时，之间均使用TBST洗3次，每次10分钟。显影的时候，条带非常奇怪。请问大家是否遇到过这个现象，希望多给我建议和意见。谢谢。

WB实验蛋白印迹形态非常不规则


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1楼2022-11-14 15:52:57
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NatureBios

金虫 (正式写手)
这个就是蛋白量大了，往下跑的时候，左右扩散导致了蛋白牵手现象，可以降低蛋白上样量，用15的分离胶那是小分子量，电压可以低一点往下跑，凝胶凝固时间延长一些

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免疫学实验技术，杭州荟丹（NatureBiosciences）（科研抗体试剂）技术支持
2楼2022-11-14 15:58:33
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)
使用的胶是一步法制胶试剂盒。120V电压全程电泳。

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3楼2022-11-14 15:59:32
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)
目的蛋白大概10kDa。蛋白电泳每孔约25微克总蛋白。

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4楼2022-11-14 16:01:36
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by NatureBios at 2022-11-14 15:58:33
这个就是蛋白量大了，往下跑的时候，左右扩散导致了蛋白牵手现象，可以降低蛋白上样量，用15的分离胶那是小分子量，电压可以低一点往下跑，凝胶凝固时间延长一些

感谢您的帮助，本次检测的蛋白大概10kDa。我今晚减少上样量试试。谢谢!

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5楼2022-11-14 16:07:14
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NatureBios

金虫 (正式写手)


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6楼2022-11-14 21:22:19
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飞飞1230.0

新虫 (小有名气)
老师您好，如果您解决不了，可以尝试联系我，我这边可以提供全自动WB检测simple western jess的服务，有需要可以联系：15236272206（微信同号）
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心静，魂静，神静。。。
7楼2022-11-15 09:07:21
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