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实验操作分享：博来霉素致大鼠肺纤维化模型
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健康雄性 Wistar大鼠,鼠龄 8~10 周,体重 250士50g。 博来霉素致肺纤维化模型的剂量:大鼠常用剂量多为5mg/kg,为8mg/kg,小鼠为3.5mg/kg。张伟等报道博来霉素1mg/kg气管插管快速灌注法可以成功复制大品肺间质纤维化模型。 其优点是方法可靠、给药剂量小、容易掌握,支气管滴注 BLM 可能首先直接影响到终末细气管上皮细胞,较早可引起肺泡内的胶原沉积反应。 整大鼠用10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔内注射麻醉,将大鼠仰卧固定于实验台,开口器固定处用丝生理盐 拉出舌,用压舌板压舌腹,在额镜直视下,趁动物吸气瞬间迅速行气管插管(Ф2mm,4~5cm)注人5mg/kgBLM0.2~0.3ml,立即旋转动物,使药液在肺内均匀分部;分别于第1、14、28天处死。第28天肺纤维化形成时可达到高峰。表现为肺泡壁厚度增加明显,但胸膜增厚的程度尚轻标本收集将大鼠全麻后称体重,仰卧固定于实验台上,沿腹正中线逐层切开腹壁,钝性分离,物腹主动脉放血处死,剖胸分离左、右支气管及双肺,自气管向右肺注入4%甲醛至胸膜展开后结料;气管,固定于4%甲醛液中1周,常规石蜡包埋,切片、HE 染色,进行组织学评价。 肺组织形态学定量:用尺型微型测微器和td600version1.0真彩色病理细胞图像分析系统在 HEX400倍下测定肺泡间隔宽度(μm)及胸膜厚度(μm),每张切片观察10个视野,每个视野测3个 肺泡壁,取平均值。 |
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