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小鼠原代神经元活细胞成像观察自噬体运动已有1人参与
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麻烦请教一下，有人做过小鼠原代神经元活细胞成像观察前的饥饿（或其他方法）诱导自噬吗？ 我们提取的C57胎鼠原代神经元种植后，正常培养在Neurobasal培养基内（Neurobasal+B27+GlutMAX+双抗），转染了GFP-LC3和目标蛋白A质粒48h后，准备在活细胞工作站中观察A对神经元轴突中自噬体（GFP-LC3）的运动情况。 查阅文献大多是在活细胞观察前3h左右进行饥饿处理来诱导自噬，但是这个饥饿的方法并不明确。我们自己做了几次尝试，观察前将Neurobasal培养基全部换成了EBSS，甚至加入了自噬诱导剂，但是最终还是没有观察到神经元中GFP-LC3的移动，不论是轴突、树突、胞体都没有观察到。 现在就困惑于此，不知道是转染后时间问题，还是活细胞观察前的诱导问题，亦或者还有其他没有注意到的问题。如果有大神做过类似的实验，还望能够不吝赐教，万分感谢。 |
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