Western GAPDH出不来
如题，我做320KD的蛋白，8%分离胶，200mA转膜3h，每次目的条带出的很好，但是GAPDH出不来，实在不知道什么原因，换过两次抗体，不过都是15年左右买的，请问各位虫友，以上情况，是抗体原因的可能性有多大？
另外，以上WB条件，40以下的marker分不开……
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有两个原因，一是你说40kd一下蛋白分不开，GPADH就在40kd下面，因此很有可能也分不开，条带非常细不好看见；再就是像楼上所说的在转膜的过程中由于蛋白分子量太小被转出去了，蛋白量损失了，信号太弱所以看不到条带。建议换个分子量大一点的内参，或者目的蛋白和内参分开跑胶，转膜，
你看看你膜是多大孔的 我估计你转太久蛋白跑了