上下游引物退火温度相差太大，退火温度梯度应该如何设置？
原来设计的引物时候没太注意，今天拿出来要做了才发现，上下游引物Tm值相差8℃，一个50一个58，请问摸退火温度的梯度应该如何设置？
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你可以换一下酶，我用过一些酶它们对退火温度要求没那么严格，我有时候上下游引物差十多度一样可以跑出，根本不需要梯度
要最好的结果就是做梯度，从50-60设几个梯度一做就知道了，软件和经验评估出来的温度没有实验结果有说服力！
如果只是要个心理安慰或者自欺欺人的结论就取平均值或者，