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sod,pod测定是遇到的问题

作者 甜筒D
来源: 小木虫 600 12 举报帖子
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在测定sod的过程中,由于第一批用试剂盒测定的数据不好,只能重新测了,其中2个梯度的材料总共只剩下0.2g叶片材料保存于-80,其他3批材料还有还有0.6g,所以只能按比例减少用量来测定,一共还要测定sod,pod,cat,可溶性糖,Pro,叶绿素含量,mda,任务多,材料少,现在正在探索用0.05g材料去实验,有没有大神懂用的材料少可不可以测定出结果来。
现在的主要问题是我的磷酸缓冲液是0.05mol,ph=7.8的,研磨完液体就会变成红棕色,这样的酶液还能不能用是不是已经失活了还能不能测定?而且很快就会变色,会不会是因为室温太高了造成的?现在由于材料有限,只能讲上清液稀释才够用,稀释之后影响测定结果吗,还是直接用0.05g材料加入5ml缓冲液测定呢?还有就是在4000lx的光下反应8分钟时A0=0 8,按照实验说明就应该停止反应了,可是其他测定管还没有变色,看不出有没有大道50%的抑制率,不明白50%抑制率是一个什么标准。求大神指点,问题有点多

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  • 精华评论
  • 氚核

    研磨完的颜色要看你具体的材料是啥。另外根据楼主的描述,建议提取液中添加适量PVP防止组织中的酚氧化产生别的颜色干扰结果。另外,材料一般可以成比例减少用量,但最好保证材料质量和提取液的比例不变,后面公式计算活性时再乘减少的倍数即可。祝好!

  • qiushi0312

    加10%PVP结果还是不错的。祝实验成功

  • ZIJI

    最近在做实验 然后用紫外法测植物CAT过氧化氢酶 植物叶子上学期摘的 然后零下八十摄氏度保存了   这个学期来测的   我们用的是0.15g叶子 研磨 定容10ml 然后离心 取上清液0.1ml 然后加0.1ml 2%的H2O2和2ml磷酸缓冲液 但是测的过程那个变化值都不是降的 就一直升  是因为酶失活 还是因为用的样品量太小 还是因为H2O2的用量有问题啊 有大神知道吗

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