以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神
筛选到一株含有目的酶的菌株，使用NCBI查找到目的酶的基因，以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR均未果。期间重新设计过引物，进行过梯度PCR但都没有结果，且每次跑胶结果都特别干净，没有任何条带。实验新手一枚，现在请问各位大神有没有遇到过这种情况？是不是可以用Taq酶进行一下PCR，但我是要PCR获得目的基因送测序，怕Taq酶保真性不高有突变。希望大家可以给出一些建议，一些我可以继续的尝试，谢谢大家了!
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基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr
primerstar扩增不出来，是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性，而普通的Taq酶没有， 所以Taq酶能扩出来的，primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好，不会出现primerstar的 情况而且大于普通酶的 灵敏度和特异性，值得 一试。如果扩增片段大于15kb的话，推荐长扩增聚合酶，下游实验对精确度要求很高的话，建议使用 具有 保真性的高保真酶。
好的，谢谢建议，明天试试
谢谢，请问primerstar可以将引物或是模板降解还是第一次听说，可以具体解释一下吗，万分感谢；会试一试用taq酶进行PCR，日后有问题还请多多指教，谢谢
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先用taq酶扩增试试，primerStar对模板要求比较高……
我也有一段目的基因，用基因组作为模板怎么都行不通，换了好多引物都不行。相同基因其他位点都p出来了。
楼主最后解决了没？