新手第一次做QPCR，有些问题想问大家
我用相同浓度的cDNA样品，为什么各个样品的β-actin以及18S内参起跳值都不一样，最大的相差十几个循环。求大神解答！！！！！用的是罗氏96仪器，trans试剂盒。
qqq.png@biostar2009@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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测的是反转录后的cDNA浓度还是反转录前RNA浓度？ 如果是前者，反转录后的cDNA浓度是不能测量的，里面有dNTP，测出来的浓度实际上是dNTP浓度，你需要在反转录前把RNA浓度调成一致再进行反转录。
相同总浓度，不代表β-actin含量相同。设至少三个重复，然后比较technical replicates。
体系一般都是20ul体系的，越做小的体系误差越大。倍数一般都是10倍逐级稀释，你用一个样本做20ul体系，10倍逐级稀释cq值不可能会一样
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楼主解决了吗，我遇到同样问题很苦恼，QQ469024841，想向您有偿咨询，跪谢