| 查看: 4493 | 回复: 131 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
市面上的假血清实在太多了……Gibco基本上全是假的，支原体太多
|
||||||
前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染 。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊  ，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……， 简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商  ……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告） 这里来分享一下支原体检测方法：1，PCR检测法。 （1） 细胞铺24孔板，5x104个/孔； （2） 每隔1d取细胞培养液留样，连取3d； （3） 细胞培养液95℃水浴加热5min，12000rpm离心1min，取上清做下一步的巢式PCR检测； （4） 巢式PCR第一轮体系和程序： 体系：模板：4步骤所得细胞培养液 2ul Primer-F(10mM): 1ul Primer-R(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 2min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （5） 巢式PCR第二轮体系和程序： 体系：模板：一轮PCR产物 2ul Primer-F2(10mM): 1ul Primer-R2(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 1min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （6） 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。  2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg 这个Primers 是依据支原体基因组中高度保守的 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。 2，DNA萤光染色法 利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。  MycoplasmaOUT处理细胞前  MycoplasmaOUT处理细胞后 由于是细胞里用的产品，抗生素类的最好谨慎使用，这里有个之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽类型的，处理时间也短，只要3天就可以了，而且对细胞也无毒无害。 |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 分子生物学 | 生工检测理论与实务 | 细胞、细菌相关 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
susanuse» 猜你喜欢
申请2024或2025年博士研究生
已经有12人回复
-
在大地上我们只过一生---看完我的阿勒泰上头了好几天，完结那天晚上几乎失眠
已经有13人回复
-
双非本科毕业论文，气人
已经有12人回复
-
化学B02口青基 代表作都是什么水平的？向大佬求助
已经有10人回复
-
每到中夜，情难自抑
已经有57人回复
-
化学口B0109(高分子合成)，拿青年基金一般需要怎样的文章水平？
已经有22人回复
-
每天学术时间不能保证，能保证的只有：
已经有10人回复
-
研0二导师分到新来的博士后靠谱吗
已经有7人回复
-
研究生在毕业答辩时挂了，遗憾
已经有13人回复
-
24年博士招生
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
男征女，武汉
+1/262
-
北京，诚征另一半
+1/156
-
复旦大学胶体材料联培博士招生
+2/140
-
湖大粤港澳大湾区创新研究院 诚聘研究助理和实习生
+1/132
-
南方科技大学微纳米力学实验室招收力学、机械、材料等方向2025级推免硕士研究生多名
+1/79
-
【招聘】河南大学未来技术学院（量子信息）面向海内外诚聘优秀人才
+1/77
-
还没有领证的时候
+1/76
-
内蒙古科技大学复合材料与工程专业招聘专任教师
+2/56
-
美国西弗吉尼亚大学化工系(能源化工) 招收2025年入学全奖博士
+2/50
-
浙江大学衢州研究院任兰会团队招聘副研究员、博士后
+2/45
-
中国海洋大学固体发光与应力传感方向招聘青年英才
+2/38
-
北京征女友
+1/38
-
牧原实验室2024年电子信息、半导体材料岗招聘启事
+1/37
-
请教铁电陶瓷材料测量铁电性能（P-E）如何制样，请说明详细流程和尺寸，谢谢
+1/35
-
香港大学化学系招聘过渡金属催化方向博士后
+1/33
-
国自然青基祈福
+2/24
-
中国科学院大学纳米学院诚聘副研究员、博士后
+2/12
-
YY/T 1832 -2022 运动医学植入器械 缝线拉伸试验方法
+1/4
-
哈工大郑州研究院刘绍琴教授课题组诚招优秀人才加盟！长期有效
+1/3
-
电池科研助理
+1/2
+1/262
123楼2015-06-23 11:07:04
