小木虫

最近实验室出了一桩怪事，高保真酶扩增，都不来条带。前两天可以扩增出来的，突然间又都不出来，全都是引物二聚体或者干脆什么也没有。用taqmix验证，出现目标条带，很亮，说明模板和引物没有问题。但是pcr的其他体系包括Q5酶，buffer以及dntp都是新买的，同...

请问有人做过用pPIC9K表达载体来做GS115酵母表达外源基因实验吗？线性化质粒酶切的是sacⅠ位点还是salⅠ位点，有何区别？线性化之后的纯化原理？怎么纯化？

我想用我合成的探针做个细胞成像，之前用PBS溶解的探针，拍不出荧光，所以我想用DMSO+Tris-Hcl溶解我的探针如果500ul培基里加5ulDMSO的话细胞会死吗？

基因编辑crispr/cas9基因敲除、敲入，干扰过表达。cdx模型、pdx模型，pdo类器官，慢病毒，腺病毒，腺相关病毒，逆转录病毒，稳转株构建有需要可以随时咨询18974812172微信同号联系方式已变更为13007485994微信同号[Lastedite...

各位大佬。。浙江这边基因合成不错的公司有那些。。。重点是要便宜。。。

使用pGEX-4T-1载体表达蛋白，在未加IPTG与加IPTG诱导组无差异，然后换了pET-28a载体，同样也出现这种奇怪的现象，已经困扰很久了，百思不得其解，望各位大佬指点迷津，小女子不甚感激。

使用pGEX-4T-1载体表达蛋白，在未加IPTG与加IPTG诱导组无差异，然后换了pET-28a载体，同样也出现这种奇怪的现象，已经困扰很久了，百思不得其解，望各位大佬指点迷津，小女子不甚感激。

做重叠pcr，但最后跑出的条带很模糊，应该怎么处理？我是两条条带连接。

请问公司给的测序结果和参考序列对不上是什么原因？可能是样品问题吗？克隆的是DNA，是用NCBI已知序列设计的引物，pcr出来跑胶大小也对的上，没连接载体的情况下可能测出序列吗？

需要敲除哺乳动物细胞上的一种膜蛋白，但本人不太了解Cas9质粒的构建，想直接包给公司帮我做出来。请问大家，有推荐的靠谱公司吗？

急急急，求大神们救救急（。。。。。。。。。。。。。。。。凑字数。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及删了，怎么这个还提示对不起，您已经发过类似内容的主题了，请不要一帖多发哦发不了）老师让我在引物（PCR引物）序列中引入蛋白标签flag，方便后续的纯化...

您好，首先感谢你的回复和帮助。我有两个问题要请教，我的结果出来只是迁徙量M和群体大小?，怎么转换成基因流Nm的形式？二是我运算的结果同一物种不同的分区方式，比方说5个种群1-5，分成3个（1、2，3、4，5），计算的结果和分成2个（1、2，3、4、5）不一致。...

请问各位大神，哪里可以测抗疟原虫或者抗疟疾活性？

本课题组欲招聘植物保护学（植物病理学）、或生物化学、微生物学类、生物技术类合作培养硕士研究生、本科实习生。课题组前期基础扎实，可保证完成学校对研究生毕业的论文等硬性要求，提供硕士论文试验费用，此外，提供硕士研究生科研津贴1000元/月（本科实习生800），免费...

小弟最近在做DNA杂交，杂交是在Tris(10mM)中进行的。用电化学方法在PBS(10mM,pH7.4)中表征时发现其很容易解离，15min信号降了一半。是不是DNA在PBS中易解离呢?不知道各位前辈老师们有没有防止其解离的方法?

你们有谁做过大肠杆菌BW25113Cas9大片段基因敲除吗，最近在做，筛选到的总是假阳性，检测Cas质粒和TargetF质粒都在，但是就是不敲除，大神们帮忙分析一下原因

本人专业光学方向，研究内容增强分子振动指纹(vibrationalfingerprints)红外光谱。不知道哪位同学能给我提供一下，某种常见的或者研究较火的蛋白质分子，脂质，核酸分子，或者病毒等等等之类的分子振动指纹，要有分子的红外波段的光学参数，折射率或者介...

各位大佬，我已提取了质粒，我需要重新构建表达载体进行原核表达，打算购买试剂盒。但是，现在需要以质粒为模板进行PCR扩增，我需要设计引物，但是我用primer5设计的正反引物（都从头开始扩增）所显示的结果都不好，没法用，有没有其他办法能够扩增出我的基因全长。急需...

想请教下RNAi测序没有载体通用引物，自己在插入目的基因上下游重新设计的，但是测序结果比对不上

最近在构建一批质粒，通过双酶切的方式在目的载体上插入400bp左右的PCR产物。之前一直做得好好的。后来发现连接转化后长的克隆慢慢的在变少，由原来的200-300个克隆一点点的变成100个，50个，20个，再后来变成1-2个，现在直接不长克隆了。按照分子生物学...

试了至少3个论坛上下载的版本，总是安装不了。求助PrimerPremier5安装软件，win10系统，64位的，谢谢拉。

pcr扩增不出想要的条带，重复多次，改变试剂也不行，是相应基因片段缺失吗？如果是这样，该怎么改变扩增策略呢？谢谢大家了！

很多情况下是无法获得理想的、具有很好衍射能力的晶体，那么对应有一些非常规的操作手法，可以极大提高获得晶体hit，以及提高衍射能力的方法。本文介绍一种更换样品存储buffer筛选同一批试剂盒，正交之后近似n倍结晶条件（n=变换buffer条件个数）。蛋白样品存储...

有没有哪个地方可以做RNA甲基化定量啊

目前看到的关于新冠等核酸检测试剂盒标明的检测限都是“拷贝数/mL”，这是怎么测出来的，看了很多文章都说是利用已知浓度的病毒颗粒或质粒十倍稀释后看最低能检测到的拷贝数，并没有写明详细做法。不理解的是，为什么检测限不以“拷贝数/反应”来表示，比如1000拷贝/mL...

基因敲除载体的构建

本人手残党，经常做qpcr验证敲降的基因效率很低，其他基因更是无变化，自我产生了深深的怀疑。请问有没有在南京的高手，这几天可以帮我跑三四块板（RNA已经提好，从测浓度逆转录开始），可以来我们实验室做或者我带着样品去你们那里做，有偿（测浓度逆转录共100，每块板...

或者是其他真核表达质粒，我手上有gs115x33以及ppiczaA，单位是大学的实验室，有大哥大姐们愿意换一换扩充一下自己的生物学工具嘛