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[交流]
磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨
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分析研究中，我们常常需要用到磁珠偶联小分子、DNA/RNA、蛋白、抗体等用于后续的分析或Pull down实验。 试验中经常会失败，后来我们总结了这一过程主要影响因素。 因为我们实验室用得最多的就是羧基磁珠偶联氨基的配体： 1、配体浓度影响很大，一般来说高浓度配体更容易偶联成功； 2、磁珠特性影响很大，特别是磁珠表面羧基密度和磁珠的悬浮特性，我们经过筛选后来主要使用PuriMag的G系列羧基磁珠最好用，其最大特点就是基团密度高、悬浮好且磁吸快，在我们的实验中甚至好于dyna的myone系列； 3、羧基磁珠的活化一般不能超过1h，我们一般采用EDC/NHS活化； 4、偶联时间和温度相关，最保险是4度过夜孵育，这样易失活的配体影响最小； 5、封闭对磁珠的非特异吸附是有较大影响的，但是有时候由于磁珠本身的表面太疏水，不大能通过封闭改变其非特异吸附。一般来说BSA封闭好于氨基乙醇等。 6、非特异吸附一般主要是对蛋白的非特异吸附，对于非蛋白相关研究，不必过分在意；但对pull down实验还是影响比较大的。 |
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