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1974707632

新虫 (小有名气)


[交流] 磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨

分析研究中,我们常常需要用到磁珠偶联小分子、DNA/RNA、蛋白、抗体等用于后续的分析或Pull down实验。
试验中经常会失败,后来我们总结了这一过程主要影响因素。
因为我们实验室用得最多的就是羧基磁珠偶联氨基的配体:
1、配体浓度影响很大,一般来说高浓度配体更容易偶联成功;
2、磁珠特性影响很大,特别是磁珠表面羧基密度和磁珠的悬浮特性,我们经过筛选后来主要使用PuriMag的G系列羧基磁珠最好用,其最大特点就是基团密度高、悬浮好且磁吸快,在我们的实验中甚至好于dyna的myone系列;
3、羧基磁珠的活化一般不能超过1h,我们一般采用EDC/NHS活化;
4、偶联时间和温度相关,最保险是4度过夜孵育,这样易失活的配体影响最小;
5、封闭对磁珠的非特异吸附是有较大影响的,但是有时候由于磁珠本身的表面太疏水,不大能通过封闭改变其非特异吸附。一般来说BSA封闭好于氨基乙醇等。
6、非特异吸附一般主要是对蛋白的非特异吸附,对于非蛋白相关研究,不必过分在意;但对pull down实验还是影响比较大的。
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Jarnnney

新虫 (小有名气)


引用回帖:
21楼: Originally posted by Sunny_777 at 2023-10-01 00:07:21
同学你好 你也在做适配体偶联磁珠吗?可以交流一下吗?我也是!
...

加我微信交流呀Jarnnney258

发自小木虫IOS客户端
23楼2023-10-04 16:47:46
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1974707632

新虫 (小有名气)


欢迎大家有什么问题和经验一起发上来交流一下。
2楼2021-07-18 18:22:08
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)



1974707632(金币+1): 谢谢参与
很好,受启发。PuriMag的羧基磁珠偶联适配体效果如何?

发自小木虫IOS客户端
4楼2021-07-27 15:26:16
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1974707632

新虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by yubeihong at 2021-07-27 15:26:16
很好,受启发。PuriMag的羧基磁珠偶联适配体效果如何?

PuriMag磁珠用起来还不错,算国产中比较好的了。
6楼2021-08-07 20:35:45
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nono20097楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
nono20098楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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nono20099楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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tzynew3楼
2021-07-18 18:27   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
i 发自小木虫Android客户端
bjdxyxy5楼
2021-07-27 15:52   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
bjdxyxy10楼
2021-08-09 10:04   回复  
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