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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨
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1974707632

新虫 (小有名气)

[交流] 磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨

分析研究中，我们常常需要用到磁珠偶联小分子、DNA/RNA、蛋白、抗体等用于后续的分析或Pull down实验。
试验中经常会失败，后来我们总结了这一过程主要影响因素。
因为我们实验室用得最多的就是羧基磁珠偶联氨基的配体：
1、配体浓度影响很大，一般来说高浓度配体更容易偶联成功；
2、磁珠特性影响很大，特别是磁珠表面羧基密度和磁珠的悬浮特性，我们经过筛选后来主要使用PuriMag的G系列羧基磁珠最好用，其最大特点就是基团密度高、悬浮好且磁吸快，在我们的实验中甚至好于dyna的myone系列；
3、羧基磁珠的活化一般不能超过1h，我们一般采用EDC/NHS活化；
4、偶联时间和温度相关，最保险是4度过夜孵育，这样易失活的配体影响最小；
5、封闭对磁珠的非特异吸附是有较大影响的，但是有时候由于磁珠本身的表面太疏水，不大能通过封闭改变其非特异吸附。一般来说BSA封闭好于氨基乙醇等。
6、非特异吸附一般主要是对蛋白的非特异吸附，对于非蛋白相关研究，不必过分在意；但对pull down实验还是影响比较大的。
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shanying1197

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1楼2021-07-18 18:21:06
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
1974707632(金币+1): 谢谢参与
很好，受启发。PuriMag的羧基磁珠偶联适配体效果如何？

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4楼2021-07-27 15:26:16
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by AmyZhouAQ at 2021-11-06 13:35:18
您好，我想用DNA链连接磁珠和铂纳米粒子，发现铂纳米粒子会吸附到磁珠的表面，虽然用BSA封闭了，也是会有吸附，这该怎么解决呢

非特异吸附只能降低，无法完全避免。注意静电互作！

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14楼2022-03-16 22:51:21
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by shanying1197 at 2021-12-23 20:51:13
采用EDC/NHS活化羧基时，EDC和NHS的浓度是多少？用PB配置吗？

不是用tris，你找www.purimagbead.com要说明书，上面很详细。

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15楼2022-03-16 22:57:56
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lgz2017 at 2022-05-24 23:32:00
楼主你好 用BSA封闭的话，一般是多少进行封闭呢

BSA用1mg/ml封闭

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17楼2022-09-27 00:07:26
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