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[交流]
磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨
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分析研究中，我们常常需要用到磁珠偶联小分子、DNA/RNA、蛋白、抗体等用于后续的分析或Pull down实验。 试验中经常会失败，后来我们总结了这一过程主要影响因素。 因为我们实验室用得最多的就是羧基磁珠偶联氨基的配体： 1、配体浓度影响很大，一般来说高浓度配体更容易偶联成功； 2、磁珠特性影响很大，特别是磁珠表面羧基密度和磁珠的悬浮特性，我们经过筛选后来主要使用PuriMag的G系列羧基磁珠最好用，其最大特点就是基团密度高、悬浮好且磁吸快，在我们的实验中甚至好于dyna的myone系列； 3、羧基磁珠的活化一般不能超过1h，我们一般采用EDC/NHS活化； 4、偶联时间和温度相关，最保险是4度过夜孵育，这样易失活的配体影响最小； 5、封闭对磁珠的非特异吸附是有较大影响的，但是有时候由于磁珠本身的表面太疏水，不大能通过封闭改变其非特异吸附。一般来说BSA封闭好于氨基乙醇等。 6、非特异吸附一般主要是对蛋白的非特异吸附，对于非蛋白相关研究，不必过分在意；但对pull down实验还是影响比较大的。 |
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1974707632(金币+1): 谢谢参与
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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楼主您好，我是用purimag的羧基磁珠（100ul）和我的有氨基修饰的核酸链（100ul 1nmol）进行2H的偶联 用的是EDC/NHS.的两步偶联法 然后用凝胶实验比较偶联前后 核酸链的浓度变化 结果显示完全没有偶联上 请问问题出在哪里呢可能？做过很多次实验了 嗯失败了 请您解惑！非常非常感谢了！ 发自小木虫Android客户端 |
20楼2023-10-01 00:05:37
21楼2023-10-01 00:07:21
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同学你好 我也是想用磁珠偶联末端修饰有氨基的核酸链 但是都偶联不上 具体的情况我在这个帖子下也做了评论 可以交流交流 你的这个偶联率怎么样嘛？非常非常感谢！ 发自小木虫Android客户端 |
22楼2023-10-01 00:09:14
24楼2023-10-04 17:02:47
