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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨
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1974707632

新虫 (小有名气)

[交流] 磁珠偶联DNA、蛋白、抗体的探讨

分析研究中，我们常常需要用到磁珠偶联小分子、DNA/RNA、蛋白、抗体等用于后续的分析或Pull down实验。
试验中经常会失败，后来我们总结了这一过程主要影响因素。
因为我们实验室用得最多的就是羧基磁珠偶联氨基的配体：
1、配体浓度影响很大，一般来说高浓度配体更容易偶联成功；
2、磁珠特性影响很大，特别是磁珠表面羧基密度和磁珠的悬浮特性，我们经过筛选后来主要使用PuriMag的G系列羧基磁珠最好用，其最大特点就是基团密度高、悬浮好且磁吸快，在我们的实验中甚至好于dyna的myone系列；
3、羧基磁珠的活化一般不能超过1h，我们一般采用EDC/NHS活化；
4、偶联时间和温度相关，最保险是4度过夜孵育，这样易失活的配体影响最小；
5、封闭对磁珠的非特异吸附是有较大影响的，但是有时候由于磁珠本身的表面太疏水，不大能通过封闭改变其非特异吸附。一般来说BSA封闭好于氨基乙醇等。
6、非特异吸附一般主要是对蛋白的非特异吸附，对于非蛋白相关研究，不必过分在意；但对pull down实验还是影响比较大的。
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shanying1197

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1楼2021-07-18 18:21:06
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Sunny_777

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yubeihong at 2022-03-16 22:51:21
非特异吸附只能降低，无法完全避免。注意静电互作！
...

同学你好 我也是想用磁珠偶联末端修饰有氨基的核酸链 但是都偶联不上 具体的情况我在这个帖子下也做了评论 可以交流交流 你的这个偶联率怎么样嘛？非常非常感谢！

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22楼2023-10-01 00:09:14
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1974707632

新虫 (小有名气)
欢迎大家有什么问题和经验一起发上来交流一下。
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2楼2021-07-18 18:22:08
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
1974707632(金币+1): 谢谢参与
很好，受启发。PuriMag的羧基磁珠偶联适配体效果如何？

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4楼2021-07-27 15:26:16
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1974707632

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yubeihong at 2021-07-27 15:26:16
很好，受启发。PuriMag的羧基磁珠偶联适配体效果如何？

PuriMag磁珠用起来还不错，算国产中比较好的了。
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6楼2021-08-07 20:35:45
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nono20097楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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nono20098楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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nono20099楼
2021-08-09 06:24   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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tzynew3楼
2021-07-18 18:27   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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bjdxyxy5楼
2021-07-27 15:52   回复  
1974707632(金币+1): 谢谢参与
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bjdxyxy10楼
2021-08-09 10:04   回复  
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