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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 化学蛋白组学样品前处理中的疑问
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xiyingliai

新虫 (著名写手)

[交流] 化学蛋白组学样品前处理中的疑问

求教蛋白组学大佬：蛋白样品biotin化之后连接streptavidin磁珠，然后进行on bead digestion前加入6m urea和10mm  dtt并65℃加热20min使蛋白变性，这一操作会不会破坏biotin和streptavidin之间的连接?
如果先将biotin化的蛋白消化再连streptavidin磁珠，连磁珠前是否需要加热灭活前一步的typsin防止其破坏streptavidin(因为它本质是个蛋白)?

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1楼2022-12-29 14:15:56
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
xiyingliai(金币+2): 谢谢参与
会破坏SA，我们用purimag的链亲和素磁珠，65度链亲和素已开始轻微解聚。建议还是消解后连bead

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xiyingliai
25楼2023-02-09 13:17:22
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chenhuanlong

新虫 (文学泰斗)
★
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yeah

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3楼2022-12-30 16:07:01
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zj_xmc

金虫 (职业作家)
★
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22222222222
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8楼2023-01-03 17:15:19
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cococozhou

金虫 (小有名气)
★
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不懂，帮顶
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13楼2023-01-04 17:51:41
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xd200620940

铜虫 (正式写手)
★
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不懂，帮顶
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20楼2023-01-06 23:05:56
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walamama

新虫 (初入文坛)
★
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多试几次
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26楼2023-02-09 21:57:24
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xiyingliai

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
25楼: Originally posted by yubeihong at 2023-02-09 13:17:22
会破坏SA，我们用purimag的链亲和素磁珠，65度链亲和素已开始轻微解聚。建议还是消解后连bead

感谢。你们是在样品中测到了较高丰度链霉亲和素么

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27楼2023-02-10 12:34:18
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冰鉴照心

新虫 (初入文坛)
★
xiyingliai(金币+2): 谢谢参与
直接用NHS磁珠通过化学键连接蛋白样品，比链霉亲和素磁珠要方便、牢靠。
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28楼2023-02-10 14:46:45
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gdflly08

木虫 (文坛精英)
★
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对不住了
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29楼2023-02-10 23:21:30
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xiyingliai

新虫 (著名写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 冰鉴照心 at 2023-02-10 14:46:45
直接用NHS磁珠通过化学键连接蛋白样品，比链霉亲和素磁珠要方便、牢靠。

NHS对所有蛋白伯氨基都连接，而我要做特定修饰组学，只能用特异性探针通过点击化学biotin化然后富集

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32楼2023-02-11 17:10:45
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wchn1985

木虫 (知名作家)
★
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对对对
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36楼2023-02-21 15:48:38
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75291ijufg

新虫 (初入文坛)
★
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不了解，帮顶一下！
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37楼2023-02-22 14:55:17
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铁拳虎

至尊木虫 (知名作家)
阔以压
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41楼2023-03-10 15:00:57
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zszly2楼
2022-12-29 21:28   回复  
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落花剑雨4楼
2023-01-03 00:15   回复  
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tzynew5楼
2023-01-03 07:57   回复  
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nono20096楼
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bjyxszd27楼
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shenrenren9楼
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假大空10楼
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babero11楼
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XG-WUST18楼
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mccbwgp39楼
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